天胡荽藥材中槲皮素的實驗鑑定論文

1 儀器與試藥

Agilent1100型高效液相色譜儀（自動進樣品），二極管陣列檢測器（DAD）； AB104-N型電子天平（德國Mettler-Toledo Group公司）；薄層色譜硅膠G（青島海洋化工有限公司）；乙腈為色譜純，其餘試劑均為分析純，水為重蒸鎦水；槲皮素對照品（中國藥品生物製品檢定所，批號：100081-200406）；10批天胡荽藥材樣品採自貴州各地，經筆者鑑定為傘形科植物天胡荽Hydrocotyle sibthorpioides Lam.和破銅錢Hydrocotyle sibthorpioides achium（Hance） Shan的乾燥全草。

2 方法與結果

2.1 定性鑑別

2.1.1 供試品溶液的製備

取乾燥至恆重的天胡荽藥材粉末約3 g，精密稱重，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇-25%鹽酸溶液（4∶1）提取液75 ml，置水浴中加熱迴流1 h，濾過，將濾液水浴蒸乾，用適量蒸餾水溶解，移至分液漏斗中，加醋酸乙酯30 ml（10，10，10 ml）萃取，合併醋酸乙酯萃取液，減壓回收醋酸乙酯至幹，殘渣加甲醇3ml使溶解，取上清液作為供試品溶液。

2.1.2 對照品溶液的製備

精密稱取槲皮素對照品13.6 mg，置50 ml的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.1.3 薄層色譜法［4］

照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液及槲皮素對照品溶液各10 μl分別點於同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（5∶4∶1）為展開劑，置鹽酸蒸氣飽和的展開缸內，展開，取出，晾乾。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

2.2 HPLC測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱為Dikma公司Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μｍ）；流動相為乙腈- 0.1%磷酸（45∶55）；流速0.8 ml/min。檢測波長370 nm，柱温25℃。進樣量10 μl。理論塔板數按槲皮素計算，應不低於5 000。在此色譜條件下，槲皮素對照品、天胡荽藥材的HPLC圖譜見圖1～2。

2.2.2 對照品溶液的製備

精密吸取“2.1.2”項下的槲皮素對照品溶液1ml，置25ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取乾燥至恆重的天胡荽藥材粉末約0.5 g，精密稱重，置50 ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-25%鹽酸溶液（4∶1）提取液25 ml，稱定重量，置水浴中加熱迴流1 h，放冷，稱重，用提取液補足減失的.重量，搖勻，濾過，精密吸取續濾液5 ml至25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm） 濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.2.3 線性關係考察

精密吸取槲皮素對照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 μl，進樣，測定峯面積，以色譜峯面積為縱座標， 槲皮素進樣量為橫座標，進行線性迴歸分析，線性迴歸方程： Y=6 442.9X-1.491 5，r=0.999 8，結果表明槲皮素在0.010 88～0.108 8 μg進樣量與峯面積的線性關係良好。對照品溶液10 μl，連續進樣5次，記錄色譜圖，結果槲皮素峯面積的RSD為0.19%。取同一供試品溶液，分別在0，2，4，6，8，10 h進樣，記錄色譜圖，結果槲皮素峯面積的RSD為1.15%。表明供試品溶液在10 h內穩定。取同批藥材5份，精密稱定，按“2.2.3”項下供試品溶液製備方法制備並測定，槲皮素平均含量為0.11%，RSD為0.96%。

3 結果

天胡荽為傘形科植物天胡荽或破銅錢的乾燥全草，具有清熱解毒、利濕之功效，用於黃疸型肝炎、膽結石、目翳［1］治療。天胡荽含槲皮素（quercetin）、槲皮素-3-半乳糖苷（quercetin-3-galactoside）等黃酮類化合物［2］，其中槲皮素具有抗炎、抗氧化、抗癌和抗突變等多種功能［3］，是天胡荽藥材的有效成分之一。通過實驗發現，在槽內先加入展開劑，再在展開缸內用小燒杯盛上鹽酸，然後進行薄層板預飽和30min，再展開，其色譜斑點圓而集中，分離度較好。天胡荽藥材除了含有槲皮素外，還有多種黃酮苷，本文以鹽酸和硫酸作為水解酸進行了比較，還對水解酸的濃度、溶劑和提取時間進行了考察。結果本文所用的條件較好。